新冠肺炎核酸檢測PCR實(shí)驗室

　　通常醫院檢驗科和病理科等科室使用的實(shí)驗室為生物安全二級（BSL-2）實(shí)驗室。但新冠病毒核酸檢測用PCR實(shí)驗室則不同，《醫療機構發(fā)熱門(mén)診臨床實(shí)驗室能力建設專(zhuān)家共識（2020 版）》說(shuō)明：對于用于新冠病毒檢測的PCR實(shí)驗室（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“PCR實(shí)驗室”）選址宜設置在發(fā)熱門(mén)診內，且建筑標準宜滿(mǎn)足加強型醫學(xué)BSL-2實(shí)驗室標準。

　　《醫學(xué)生物安全二級實(shí)驗室建筑技術(shù)標準》T/CECS 662-2020則對加強型醫學(xué)BSL-2實(shí)驗室建筑技術(shù)要求進(jìn)行了規定?！夺t療機構臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室工作導則》對PCR實(shí)驗室布局和流程進(jìn)行了明確規定。

　　《關(guān)于印發(fā)醫療衛生機構檢驗實(shí)驗室建筑技術(shù)導則（試行）的通知》則對檢驗實(shí)驗室建筑技術(shù)做出了整體要求。下面結合上述四部規范相關(guān)要求和實(shí)際建設的PCR實(shí)驗室案例對建設要點(diǎn)進(jìn)行梳理

   一、1PCR實(shí)驗室應合理選址和布局

　　標準的PCR實(shí)驗室一般分為四個(gè)區，一區為試劑準備區，二區為標本制備區，三區為PCR擴增區，四區為產(chǎn)物分析區。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區域必須嚴格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產(chǎn)物分析區。各實(shí)驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。場(chǎng)地一般要求在80平米以上，此標準PCR實(shí)驗室可開(kāi)展包括新冠病毒在內的常規分子檢測項目。而如今市面上絕大部分新冠病毒檢測試劑盒是在熒光定量PCR平臺上開(kāi)發(fā)的，因此沒(méi)有產(chǎn)物分析區也不會(huì )影響新冠病毒的檢測，60-80平米的場(chǎng)地就能滿(mǎn)足要求，但是其他如基于一代測序與基因芯片的檢測項目就無(wú)法開(kāi)展。

　　PCR實(shí)驗室應合理規劃檢驗人員

　　PCR實(shí)驗室標本制備室的生物安全要求最高，檢驗人員進(jìn)入該區域緩沖間前需要在更衣室穿防護服，實(shí)驗結束后在緩沖間脫掉防護服，因此需要設置更衣室和合理規劃進(jìn)出實(shí)驗室動(dòng)線(xiàn)。

　二、PCR實(shí)驗室氣流組織應符合定向氣流原則

　　氣流組織應有利于室內氣流由被污染風(fēng)險低的空間向被污染風(fēng)險高的空間流動(dòng)，最大限度減少室內回流與渦流。通風(fēng)空調系統應保證各工作區的空氣不產(chǎn)生交叉污染。

　　實(shí)驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產(chǎn)物分析區進(jìn)行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴增前的區域。

　　標準制備區要保持負壓

　　標本制備區為實(shí)驗室核心工作區，其主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。取樣時(shí)病毒還未滅活，且在取樣操作時(shí)，容易造成氣溶膠擴散。為保護人員安全，必須在生物安全柜內操作，防止標本氣溶膠的擴散。此后，標本經(jīng)過(guò)滅活處理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人員在對樣本進(jìn)行檢測時(shí)相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒(méi)有受到影響。后續操作時(shí)主要防止含有病毒核算的氣溶膠污染造成“假陽(yáng)性”現象。因此，該區會(huì )產(chǎn)生污染源物，該區對緩沖間和試劑準備室保持負壓，負壓值小于擴增分析室。

　　三、核酸檢測實(shí)驗室建設的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)

　　1、平面布局：不論是組合式還是分散式布置的PCR實(shí)驗室，各功能房間均宜設置獨立緩沖間。

　　2、區域空氣流向：為避免交叉污染，PCR實(shí)驗室空氣流向必須嚴格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產(chǎn)物分析區。

　　3、通風(fēng)空調：為避免交叉污染，各功能用房?jì)瓤諝獠荒軗交??；旌鲜絇CR實(shí)驗室應采用新風(fēng)直流空調系統，當采用新風(fēng)系統有困難時(shí)，各區域的空氣只能在自己的房間內循環(huán)。

　　4、生物安全：按照新型冠狀病毒實(shí)驗室生物安全指南（第二版）的規定，2019-nCoV病原體暫按照第二類(lèi)病原微生物進(jìn)行管理，則樣本植被區宜為負壓或加強型P2實(shí)驗室，核酸操作應在生物安全柜內進(jìn)行。

　　關(guān)鍵技術(shù)措施包括：

　　*絕對負壓（避免室內潛在污染外泄）

　　*氣流組織（室內定向流，從低污染風(fēng)險區流向高污染風(fēng)險區）

　　*排風(fēng)無(wú)害化處理（高效過(guò)濾、高空排放）

　　四、核酸檢測實(shí)驗室氣流組織建議

　　1、氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應使室內氣流停滯的空間降低到最小程度。

　　2、在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點(diǎn)的上方附件不得設送風(fēng)口

　　3、高效過(guò)濾器排風(fēng)口應設在室內被污染風(fēng)險最高的區域，單向布置，不得有障礙；

　　4、不能以回（排）風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)高效過(guò)濾裝置與排風(fēng)總管的連接必須全部是實(shí)體風(fēng)管。